上海信裕生物科技有限公司

NK-92 细胞系（株)冻存技术
1.选用细胞生长状态好(80-90%),生长数量大于5×10^5 的细胞
进行冻存。
2.细胞冻存前24 小时，须更换新鲜细胞培养液一次。
3.贴壁的细胞一般用胰酶消化，将消化后的细胞悬液收集至细胞
离心管中。注：消化液配比为：0.25%胰蛋白酶＋0.02%EDTA。
4.离心管在1000rpm 下离心3 分钟后，小心弃上清液。
5.将细胞冻存液加入细胞离心管中，悬浮细胞。细胞计数调整至
5×10^5/ml.
6.将悬浮细胞放置细胞冻存管中。密封细胞冻存管。标明细胞种
类和冻存日期。请注意：封口一定要严，否则复苏时出现爆裂。
请按下列顺序降温保存细胞：室温→4℃（20 分钟）→冰箱冷冻
室（60 分钟）→超低温冰箱（-80℃过夜）→液氮。
细胞冻存液常用配方：
60%完全细胞培养液（不含有血清、添加剂、双抗）+30%胎牛
血清+10%CMSO
按常规经验：100mm 培养皿长满90%以上，可冻存2 支1ml
的冻存管。复苏注意，直接将快速溶解的冻存液加到培养皿中，
并加入新的培养基和血清，第二天换液去除死细胞和DMSO，
第三天就已长满。也可离心去除DMSO，取溶解细胞冻存液再
加入5ml 新鲜基础培养基800rpm/5min,去上清，将细胞沉淀吹
散加入10ml 培养体系，第三天也已长满。